2010X1118），混勻細胞。
 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。

 
情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支適當?shù)碾x心管，依次小心加入分離液 1 及分離液 2（分離液 1 與分離液 2 比例 2：1）,試劑總量與稀釋后的樣本量相等。

 

• 將血液樣本小心加于分離液之液面上，550-750g（最大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心

 
時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。
 

• 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10。

 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心

 
 
管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會
 
變成毛面，影響細胞分離效果。
 

• 分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。

 

• 血液樣本不需稀釋，直接進行分離即可。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助，具體聯(lián)系方式詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗中性粒細胞提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。
 

	紅細胞		白細胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（個/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

• 所獲得中性粒細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 
D.PCR 技術(shù)
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因		建議解決方案
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短		適當增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后白環(huán)層彌散	細胞密度過大		調(diào)整細胞密度

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小

 

• 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

 

• 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

 
能出現(xiàn)紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到最佳分離效果，
 
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。