大量 DNA 產(chǎn)物純化試劑盒

版本號：08152012
MaxiDNA Purification Kit
大量 DNA 產(chǎn)物純化試劑盒
目錄號：  K0517
保   存：  室溫
組分說明
Cat.No.                                 K0517
KitSize                                   50
BufferPB                               60ml
BufferPS                                  15ml
BufferPW（concentrate）         10ml
BufferEB                                  10ml
SpinColumnDL                       50
CollectionTube（2ml）           50
產(chǎn)品簡介
      本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù)，通過快速簡單的結(jié)合-洗滌-洗脫步驟即可從大量的 PCR 產(chǎn)物或酶反應(yīng)液（酶切，連接，探針標(biāo)記等）中純化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段，純化過程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等雜質(zhì)，從而獲得高純度，高濃度，完整性好的 DNA 片段，回收率高達(dá) 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用于測序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1.本試劑盒可無選擇性的回收溶液中所有 DNA 片段，如需選擇性回收特定片段，同時(shí)去除其他不同大小片段，請選擇我公司的膠回收試劑盒（K0524, 加 K2302，K0518 或 K0526）。
2.第--次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在BufferPW中加入無水乙醇。
3.使用前請檢查BufferPB是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
4． 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)。
5． 所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。
自備：無水乙醇，離心管
 
操作步驟
1.估計(jì)DNA反應(yīng)液的體積，加入5倍體積的Buffer PB，充分混勻（如DNA反應(yīng)體系為100μl，則加入500μlBufferPB，無需去除石蠟油或礦物油）。
注意：在加入BufferPB后檢測溶液的pH值，若pH值大于7.5，可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸鈉（pH5.0），從而將pH值調(diào)到5-7。
2.柱平衡：向已裝入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDL）中加入200  μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
3.將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容積為700μl，若樣品體積大于700μl可分批加入 。
4. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，
5. 將吸附柱放回收集管中。
6.注意：如果純化的DNA用于鹽敏感實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測序），建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
7. 將吸附柱放到一個(gè)新離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加100 μl Buffer EB（pH 8.5），室溫放置2分鐘。
8. 12,000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
 
注意：1）洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間（可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍）。
2）為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重復(fù)步驟6。
3）洗脫體積不應(yīng)小于50μl，體積過少會影響回收率。
4）如果使用TE洗脫，需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續(xù)的酶促應(yīng)。
5）回收大于10kb的DNA片段時(shí)，BufferEB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱，適當(dāng)延長吸附和洗脫時(shí)間，可增加回收效率。
 
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